动物模型是医学研究者构建的一种生命载体，旨在模拟人类疾病的表现，精准地复刻疾病的复杂进程与关键特征。这些模型主要应用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学的研究，包括新药筛选等领域。一些经典的动物模型如实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型、糖尿病模型、肠炎模型、帕金森模型和阿尔茨海默病（AD）模型等，广泛被应用于科学研究。

实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是多发性硬化症（MS）最常用的动物模型，展现出许多临床和病理生理学特征。EAE模型种类多样，能够反映人类MS的不同临床、免疫学和组织学特征。通过主动诱导的EAE小鼠模型易于诱导且结果稳定、可复制，特别适用于转基因小鼠在药物或特定基因对自身免疫性神经炎症影响的研究。小鼠通过皮下注射中枢神经系统匀浆或髓鞘蛋白肽进行免疫。

由于这些肽的免疫原性较低，因此需要使用强效佐剂。EAE的易感性和表型受所选抗原及啮齿动物品系的影响。C57BL/6小鼠是转基因小鼠构建中最常用的品系，它对髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）有良好的反应。接种时将免疫原性表位MOG35-55悬浮在完全弗氏佐剂（CFA）中进行免疫，并在免疫当天及两天后注射百日咳毒素以增强诱导效果。

小鼠在免疫后9-14天内通常会出现“经典”的自限性单相EAE，主要表现为上升性的弛缓性瘫痪。通过临床评分系统对小鼠进行每日评估，实验持续25-50天。EAE模型诱导的成功率受到多种因素的影响，包括小鼠的种类和性别、百日咳毒素的剂量、佐剂的使用及实验基础和建模经验的丰富性。

一、EAE造模方法

1. 实验动物： 6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠。

2. 动物适应： 动物需在实验环境中适应一周，保持温度、湿度和光照条件稳定，确保它们能够自由获取食物和水。

3. EAE模型建立：

1. MOG(35-55)溶液配制：将MOG(35-55)粉末充分溶解于预冷的无菌PBS中，终浓度为20mg/mL，该溶液须现配现用以避免失效。
2. 弗氏完全佐剂（CFA）溶液配制：将热灭活结核杆菌H37Ra悬浮于CFA中，需避免与皮肤和眼睛接触，确保操作安全。
3. 抗原乳液制备：按照1:1体积比将MOG(35-55)多肽和CFA溶液进行乳化。
4. PTX溶液的制备：将百日咳毒素在双蒸水中复溶，并在无菌PBS中稀释。
5. 麻醉小鼠：使用异氟烷麻醉小鼠。
6. EAE模型接种：将乳化的MOG(35-55)多肽溶液注射入小鼠皮下，同时进行去增强疾病诱导的PTX注射。

二、EAE模型监测

1. 临床评分及体重监测：每日评估体重和临床评分，EAE的发作通常与体重减轻相关。需记录小鼠体重及临床表现。

2. 行为学检测：包括运动功能评估和抑郁样行为检测，通过实验如转棒实验和强迫游泳实验验证小鼠的行为特征。

3. 组织病理学验证：取材与处理后，对脊髓和脑组织进行切片和染色，以评估炎性浸润和髓鞘脱失情况。

4. 分子生物学验证：采用流式细胞术、ELISA和Western Blot等技术分析细胞亚群及细胞因子表达。

三、模型成功标准

基础标准为发病率达到80%（临床评分≥2），病理验证显示炎性浸润及髓鞘脱失确证。高级标准包括行为学异常和分子标志物的显著变化。

四、EAE造模无症状原因分析

常见问题及解决方案包括：

• 注射部位形成硬结：加强乳化，重新乳化以确保有效吸收。
• 无明显EAE症状：确认免疫激活，必要时提高PTX剂量。

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