尊龙凯时推出的乙型流感病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒，结合了探针法荧光定量PCR的先进原理，具有多项显著特点：

产品特点

1. 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板。
2. 高灵敏度：引物等组分经过优化，能有效提高检测灵敏度。
3. 附带阳性对照：方便用户区分假阴性样品。
4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，确保无交叉反应。
5. 可定性与定量检测：在定量检测中，线性范围至少覆盖5个数量级。
6. 充分的实验容量：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 主要用于科研：仅限于研究用途。

操作步骤

一、DNA提取（样本制备区）

使用自选方法提取与纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为避免污染，请在独立区域进行稀释操作。
1. 标记6个离心管，分别标示为7，6，5，4，3，2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中添加5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，并放冰待用。
4. 重复上述操作，依次稀释至6个不同 dilution 的标准样品。如果不需要制作标准曲线，则只需将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

准备N+2个qPCR管（N为待检样品数量），向各PCR管中添加必要成分（具体见说明书可向< strong>尊龙凯时索取），然后转移至样本准备区。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中分别加入2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照管。随后离心30秒，并立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管置于PCR扩增仪器中，运行扩增程序（具体见说明书可向< strong>尊龙凯时索取）。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，通过Ct值推算样品DNA浓度的log值。
2. 无标准曲线时，参考如下标准判定结果：
   阳性对照：Ct值<30，有明显指数增长，呈典型S型曲线。
   阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长期。
   样本检测：Ct值<35，表明阳性；Ct值38或无Ct值，表明阴性；若Ct值在35-38范围，应复检，如确认则可判定为阳性。

运输及保存

本产品需低温运输，存放于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独保存，以防污染其他试剂。